MICROBIOLOGÍA

ROTAVIRUS - INTRODUCCIÓN El Rotavirus es el agente responsable más común de gastroenteritis aguda sobre todo en en niños. Se transmite por vía oral-fecal con un periodo de incubación de 1-3 días. Aunque lo ideal para la detección del antígeno es el ensayo de muestras tomadas en el 2-5 día de la enfermedad, el rotavirus todavía puede ser encontrado mientras que el sistema de diarrea continúe. La gastroenteritis rotaviral puede ser mortal para sectores de la población en riesgo como niños, ancianos y pacientes inmunocomprometidos. Los virus se multiplican en los núcleos de células y tienden a adquirir especies específicas produciendo efectos citopáticos (ECP).  Debido a que el rotavirus es extremadamente difícil de cultivar, no es común usar el aislamiento del virus en el diagnóstico de la infección. En su lugar, se han desarrollado una gran variedad de técnicas para la detección del rotavirus en heces. - FUNDAMENTO El test NADAL Rotav

ANTIBIOGRAMA (EPSILON-TEST) - INTRODUCCIÓN Se trata de un método que combina los métodos de difusión en agar y los de dilución para determinar la CMI. En el método E-test podemos, mediante lectura directa, d eterminar la concentración mínima inhibitoria (CMI) . La técnica, que se emplea, es similar a la de difusión en agar pero en lugar de discos utiliza tiras de E-test que contienen, en su superficie inferior, un gradiente de concentración del antimicrobiano (equivalente a 15 diluciones). Cuando el antibiótico difunde en el agar, establece un gradiente continuo de antimicrobiano a lo largo de la tira y después de la incubación se forma una zona elíptica de inhibición del crecimiento. La CMI se corresponde con el punto donde el borde del área de inhibición del crecimiento intersecciona con la tira. - MATERIAL Y REACTIVOS Se utilizan los mismos materiales que en el método de Kirby-Bauer, a excepción de las tiras de  Epsilon-Test . - PROCEDIMIENTO E

LAMINOCULTIVO - INTRODUCCIÓN Los l aminocultivos    proporcionan un sistema adecuado, fácil de usar y económico para el control microbiológico de soluciones líquidas. Cada laminocultivo contiene dos caras con medio base agar, con una superficie útil de 12  cm 2  por cara. Las dos caras pueden tener distintos medios, por lo que con un dispositivo se puede tener doble información de la contaminación microbiana. - FUNDAMENTO En nuestro caso por una cara contiene el medio  CLED  y por la otra el medio  Mac Conkey , ambas nos ayudarán a identificar el tipo de bacteria.    - PROCEDIMIENTO 1.  Desenroscamos el tapón del tubo y extraemos la lámina soporte con los dos medios de cultivo. Hay que evitar cualquier contacto del agar con los dedos o con cualquier superficie. 2. Sumergir el laminocultivo en la orina a analizar 3. Eliminamos el sobrenadante sacudiendo suavemente el laminocultivo o el

COPROCULTIVO Microorganismos como protozoos, bacterias y virus pueden ser responsables de cuadros gastrointestinales caracterizados por diarrea, que a veces se acompaña de vómitos, dolor abdominal y fiebre. Ante la sospecha de gastroenteritis bacteriana es necesario realizar un  cultivo de heces o coprocultivo  que permita aislar e identificar al microorganismo responsable del proceso diarreico. Se deben recoger las primeras heces de la mañana, tras una higiene escrupulosa de la zona rectal con agua y jabón. Las heces se recogen en un recipiente limpio, libre de residuos de detergentes o desinfectantes, sin que se mezclen con la orina. Con una espátula o cucharilla limpia (mejor estéril), se toma una pequeña cantidad de materia fecal, especialmente de las partes mucosas, purulentas o sanguinolentas y se trasladan a un frasco estéril de boca ancha. Actualmente se impregnan, en abundancia, un par de escobillones y se introducen en sus tubos de soporte y transporte (medi

UROCULTIVO - FUNDAMENTO El urocultivo es un cultivo que se realiza para detectar la presencia bacteriana en orina. Se realiza ante la sospecha de infección, para confirmar o descartar dicha presencia. Se utilizan 3 medios:  Cled  (diferencial para recuento y aislamiento) McConkey  (selectivo para Enterobacterias) CPS  (cromogénico que permite el aislamiento, recuento e identificación directa).  Nosotros vamos a utilizar únicamente el medio de Cled. - MATERIAL Mechero Bunsen Asa de plástico calibrada de 10 microlitros Asa de platino - MUESTRA Orina patológica - PROCEDIMIENTO 1. Introducimos un asa calibrada en la orina, y tomamos la muestra (la que queda adherida al aro del asa) 2. A continuación, hacemos una estría desde el borde hasta el centro de la placa, y a partir de ella, estriamos perpendicularmente de derecha a izquierda 3. Finalmente, realizamos dos firmas a cada lado - RESULTADOS

ANTIBIOGRAMA (KIR BY-BAUER) - INTRODUCCIÓN Se denomina así al conjunto de técnicas, empleadas en el laboratorio, para determinar “in vitro”  el grado de sensibilidad de los microorganismos frente a la acción de  distintos agentes antimicrobianos . Esto permite seleccionar el compuesto más adecuado para el tratamiento de una infección bacteriana. Las pruebas más utilizadas se basan en el enfrentamiento “in vitro” del microorganismo, aislado de una muestra biológica, con distintas concentraciones del antimicrobiano. - FUNDAMENTO Nosotros vamos a utilizar el método de difusión en agar o método de Kirby-Bauer. Este método consiste en depositar discos de diferentes antibióticos, sobre la superficie de una placa Petri que contiene agar previamente inoculado con el microorganismo y tras un periodo de incubación de 18-24 horas, observar la zona o halo de inhibición que aparece rodeando al disco de antibiótico. El medio de cultivo más frecuentemente empleado es el de  Müel

API 20E La batería de pruebas API20E es un sistema de identificación rápida para bacterias de la familia Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram (-). Básicamente consta de 21 test bioquímicos estandarizados y miniaturizados y una base de datos. Este sistema presenta las ventajas de ser rápido, eficaz y de permitir realizar numerosas pruebas a la vez. Cada tira de API 20E contiene 20 microtubos o pocillos con distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una prueba bioquímica distinta. Los microtubos se inoculan con una suspensión de microorganismos, en agua o solución salina, que rehidrata los medios. Las tiras o galerías se incuban a 37°C y por efecto del metabolismo bacteriano se producen cambios de color espontáneos o bien por la adicción de reactivos. La lectura de las reacciones se hace mediante comparación con una tabla de lectura donde se indica si los microorganismos deben considerarse positivos o negativos para cada reacción según el color aparecido. -