PRÁCTICA: ESTUDIO DE LA PRESENCIA DE ROTAVIRUS POR INMUNOCROMATOGRAFÍA (15/02/18)

ROTAVIRUS


- INTRODUCCIÓN

El Rotavirus es el agente responsable más común de gastroenteritis aguda sobre todo en en niños.
Se transmite por vía oral-fecal con un periodo de incubación de 1-3 días. Aunque lo ideal para la detección del antígeno es el ensayo de muestras tomadas en el 2-5 día de la enfermedad, el rotavirus todavía puede ser encontrado mientras que el sistema de diarrea continúe. La gastroenteritis rotaviral puede ser mortal para sectores de la población en riesgo como niños, ancianos y pacientes inmunocomprometidos.

Los virus se multiplican en los núcleos de células y tienden a adquirir especies específicas produciendo efectos citopáticos (ECP). 
Debido a que el rotavirus es extremadamente difícil de cultivar, no es común usar el aislamiento del virus en el diagnóstico de la infección. En su lugar, se han desarrollado una gran variedad de técnicas para la detección del rotavirus en heces.


Resultado de imagen de ROTAVIRUS


- FUNDAMENTO

El test NADAL Rotavirus es un inmunoensayo de flujo lateral para la detección cualitativa de Rotavirus en muestras fecales.

En este ensayo el Rotavirus se detecta con la ayuda de anticuerpos específicos. Tras añadir la muestra contenida en el búfer a la muestra fecal, un anticuerpo específico marcado con color se liga al virus, si está presente en la muestra.
Cuando el complejo migra a través de la membrana por acción capilar, es capturado con la ayuda de otro anticuerpo específico en la parte de la línea de test. Entonces aparecerá la línea de test en rojo. Si el virus no está presente, el anticuerpo marcado con color no podrá ligarse en la parte de la línea de test. Entonces, no se formará la línea de test roja. Por lo tanto, la presencia de una línea coloreada en la línea de test indica un resultado positivo, mientras que la ausencia de ésta indica un resultado negativo.

Como procedimiento de control, aparecerá una línea coloreada siempre en la parte de control del test, indicando que el volumen de muestra añadido ha sido adecuado.

- MUESTRA

Muestra de heces
Resultado de imagen de test NADAL rotavirus

- MATERIAL Y REACTIVOS

  • 1 pipeta desechable.
  • 1 tubo con búfer para la recolección de muestra
  • Placa de inmunocromatografía
















- PROCEDIMIENTO

1. Desenroscamos la tapa del tubo de recolección de la muestra e introducimos el aplicador en la muestra al menos en 3 partes diferentes de forma aleatoria para recoger aproximadamente 50 mg de deposición fecal.
2. Volvemos a colocar el aplicador en el tubo y enroscamos el capuchón
3. Agitamos el tubo de recolección para que la muestra y la disolución del búfer quede bien mezclada. 
4. Sacamos el dispositivo de su envoltorio y lo colocamos sobre una superficie limpia y plana.
5. Rompemos la punta del tubo recolector girándolo
6. Mantenemos el tubo verticalmente y vertemos 3 gotas de la solución en el pocillo del dispositivo del test aplicando presión en la barrera del tubo.
7. Leemos el resultado tras pasados unos 10 minutos

- INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

  • Resultado negativo: Solo aparece una línea coloreada en la zona de control.
  • Resultado positivo: Aparecen dos líneas distintas coloreadas en la membrana (zona de control y zona de test).
  • Resultado no válido: La línea de control no aparece.




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