PRÁCTICA: API 20 E Y API 10 S (16/01/18)

API 20E

La batería de pruebas API20E es un sistema de identificación rápida para bacterias de la familia Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram (-). Básicamente consta de 21 test bioquímicos estandarizados y miniaturizados y una base de datos. Este sistema presenta las ventajas de ser rápido, eficaz y de permitir realizar numerosas pruebas a la vez. Cada tira de API 20E contiene 20 microtubos o pocillos con distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una prueba bioquímica distinta.

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Los microtubos se inoculan con una suspensión de microorganismos, en agua o solución salina, que rehidrata los medios. Las tiras o galerías se incuban a 37°C y por efecto del metabolismo bacteriano se producen cambios de color espontáneos o bien por la adicción de reactivos.

La lectura de las reacciones se hace mediante comparación con una tabla de lectura donde se indica si los microorganismos deben considerarse positivos o negativos para cada reacción según el color aparecido.

- INÓCULO BACTERIANO

E. Coli

- MATERIAL
  • Pipeta Pasteur 
  • Agua destilada 
  • Parafina 
  • Asas de siembra estériles 
  • Gradilla para ampollas 
  • Suero salino 
  • Tijeras



- REACTIVOS
  • TDA 
  • VP (VP1 Y VP2) 
  • NIT1 Y NIT2 
  • Reactivo de Kovac



- PROCEDIMIENTO

1. Tomar una colonia bien aislada de cada microorganismo y resuspenderla homogéneamente en 5 mL de solución salina (1% de NaCl) o 5 mL de agua estéril (hasta obtener una suspensión con ligera turbidez).
















2. Realizamos la cámara húmeda poniendo unas gotas de agua destilada en los alvéolos del soporte

3. Llenamos con la suspensión de bacterias los tubos (no la cúpula) de todos los pocillos.

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4. Llenamos la cúpula de los pocillos CIT , VP, GEL con la suspensión de bacterias.

5. Llenamos con parafina las cúpulas de los pocillos ADH, LDC, ODC, URE, H2S para obtener anaerobiosis.


6. Ponemos la tira en su propia cámara húmeda de incubación.

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7. Incubamos a 37ºC durante 18-24 horas



- RESULTADOS

Obtenemos lo siguiente:




La lectura de los resultados se lleva a cabo por comparación de los colores de cada pocillo con los de las tablas de lectura. En caso de que 3 o más ensayos (test GLU + o -), resultasen positivos, anotar en la hoja de resultados todas las reacciones espontáneas y después revelar los ensayos que necesitan la adición de reactivos reveladores:




TDA
  • Añadir una gota de FeCl3 10 %. 
  • Positivo = color marrón oscuro.



VP

  • Añadir una gota del reactivo 1 (KOH al 40%) y una gota del reactivo 2 (C2 H5 OH).
  • Positivo = color rosa fuerte o rojo en 5-10 minutos.



IND
  • Añadir una gota de reactivo de Kovacs.
  • Positivo = anillo rosa-rojo
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OXIDASA
  • Añadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recién preparado. 
  • Positivo = color azul que aparece inmediatamente

GLU
Prueba de reducción de nitratos a nitritos (NO2) y en nitrógeno (N2).
 
  • Añadir una gota de los reactivos NIT 1 y NIT 2 en el tubo GLU (de glucosa). Esperar 2 o 5 minutos. Una coloración roja indica una reacción positiva.
  • Si no vira, se añade un poco de zinc (para reducir nitratos) y se observa si aparece color (quedaban nitratos) o permanece incoloro (no quedaban nitratos en el cultivo).



- RESULTADOS

Del conjunto de reacciones y resultados se obtiene un perfil numérico de 7 cifras. Los pocillos están separados en grupos de tres: en total tenemos 7 grupos de tres tubos o tripletes (el test número 21 corresponde al test de la oxidasa). A cada pocillo se le da el valor 0, 1, 2 o 4.
  • Si la reacción es negativa se pone 0. 
  • Si la reacción es positiva se pone: 1 si es el primer pocillo de un triplete, 2 si es el segundo, 4 si es el tercero. 
  • Se suman los valores de cada triplete y se obtiene un código de 7 cifras. Con este código se busca en la tabla de identificación la especie de que se trata.


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- INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Comparando los resultados con una imagen patrón, el código de nuestra bacteria es: 5044552 (E. Coli)

API 10 S
Resultado de imagen de API 10 S
La batería de pruebas API 10 S es un sistema de identificación rápida para la identificación de bacterias de la familia Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram (-). Básicamente consta de 11 test bioquímicos estandarizados y miniaturizados y una base de datos.


- INÓCULO BACTERIANO

Serratia


- MATERIAL
  • Pipeta Pasteur
  • Agua destilada 
  • Parafina 
  • Asas de siembra estériles 
  • Gradilla para ampollas 
  • Suero salino 
  • Tijeras 



- PROCEDIMIENTO

1. Tomar una colonia bien aislada de cada microorganismo y resuspenderla homogéneamente en 5 mL de solución salina (1% de NaCl) o 5 mL de agua estéril (hasta obtener una suspensión con ligera turbidez).

2. Realizamos la cámara húmeda poniendo unas gotas de agua destilada en los alvéolos del soporte

3. Llenamos con la suspensión de bacterias los tubos (no la cúpula) de todos los pocillos.

Observar dicho proceso en el siguiente vídeo:


4. Llenamos la cúpula de los pocillos CIT, VP, GEL con la suspensión de bacterias.

5. Llenamos con parafina las cúpulas de los pocillos ADH, LDC, ODC, URE, H2S para obtener anaerobiosis.

6. Ponemos la tira en su propia cámara húmeda de incubación.


7. Incubamos a 37ºC durante 18-24 horas

 Obtenemos lo siguiente:



 8. Echamos los reactivos empleados en la anterior práctica, realizando el mismo procedimiento
- RESULTADOS







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