PRÁCTICA: ANTIBIOGRAMA (08/02/18)

ANTIBIOGRAMA (KIRBY-BAUER)

- INTRODUCCIÓN

Se denomina así al conjunto de técnicas, empleadas en el laboratorio, para
determinar “in vitro” el grado de sensibilidad de los microorganismos frente a la acción de distintos agentes antimicrobianos. Esto permite seleccionar el compuesto más adecuado para el tratamiento de una infección bacteriana.
Las pruebas más utilizadas se basan en el enfrentamiento “in vitro” del
microorganismo, aislado de una muestra biológica, con distintas concentraciones del
antimicrobiano.
Imagen relacionada
- FUNDAMENTO
Nosotros vamos a utilizar el método de difusión en agar o método de Kirby-Bauer.
Este método consiste en depositar discos de diferentes antibióticos, sobre la superficie de una placa Petri que contiene agar previamente inoculado con el microorganismo y tras un periodo de incubación de 18-24 horas, observar la zona o halo de inhibición que aparece rodeando al disco de antibiótico. El medio de cultivo más frecuentemente empleado es el de Müeller-Hinton, que permite el crecimiento de casi todas las bacterias. Cuando las bacterias lo requieran para su crecimiento, también se pueden utilizar medios como Agar sangre (para estreptocos) y Agar chocolate (para Haemophylus y Neisseria).
- INÓCULO BACTERIANO
 E. Coli








- MATERIAL
  • Asa de siembra
  • Hisopo de algodón
  • Suero fisiológico
  • Medio Müeller-Hinton
  • Discos con antibiótico
  • Regla
















- PROCEDIMIENTO

1. Se prepara un inoculo bacteriano, que tenga una turbidez equivalente al 0,5 de la escala de McFarland, para ello cogeremos unas 3-4 colonias y las resuspenderemos en 3-4 ml de suero.



2. Inocular la superficie de una placa de agar de Müeller-Hinton con el hisopo, pasándolo uniformemente por toda la superficie en tres direcciones. Por último pasar
el hisopo por el reborde de la placa de agar. Dejar secar 5 minutos.



3. Con unas pinzas estériles, colocar los discos de antibiótico (colistina, tobramicina, gentamicina, colimicina y amoxicilina) sobre la superficie del agar apretándolos suavemente.

         





4. Incubar la placa en posición invertida a 37° C durante 18-24 horas.

5. Medir los diámetros de las zonas de inhibición con una regla o un calibrador, utilizando luz reflejada sobre fondo negro.
                
                                           

- RESULTADOS

  • C - 3,1 cm = 31 mm (sensible)
  • NN - 2 cm = 20 mm (sensible)
  • CL - 1,2 cm = 12 mm (dudoso)
  • AMC = 2,5 cm = 25 mm (sensible)
  • GM = 2,2 cm = 22 mm (sensible)




Comentarios

Publicar un comentario

Entradas populares de este blog

PRÁCTICA: API 20 E Y API 10 S (16/01/18)

Imagen
API 20E La batería de pruebas API20E es un sistema de identificación rápida para bacterias de la familia Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram (-). Básicamente consta de 21 test bioquímicos estandarizados y miniaturizados y una base de datos. Este sistema presenta las ventajas de ser rápido, eficaz y de permitir realizar numerosas pruebas a la vez. Cada tira de API 20E contiene 20 microtubos o pocillos con distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una prueba bioquímica distinta. Los microtubos se inoculan con una suspensión de microorganismos, en agua o solución salina, que rehidrata los medios. Las tiras o galerías se incuban a 37°C y por efecto del metabolismo bacteriano se producen cambios de color espontáneos o bien por la adicción de reactivos. La lectura de las reacciones se hace mediante comparación con una tabla de lectura donde se indica si los microorganismos deben considerarse positivos o negativos para cada reacción según el color aparecido. -
Leer más

PRÁCTICA: ANTIBIOGRAMA (EPSILON-TEST)

Imagen
ANTIBIOGRAMA (EPSILON-TEST) - INTRODUCCIÓN Se trata de un método que combina los métodos de difusión en agar y los de dilución para determinar la CMI. En el método E-test podemos, mediante lectura directa, d eterminar la concentración mínima inhibitoria (CMI) . La técnica, que se emplea, es similar a la de difusión en agar pero en lugar de discos utiliza tiras de E-test que contienen, en su superficie inferior, un gradiente de concentración del antimicrobiano (equivalente a 15 diluciones). Cuando el antibiótico difunde en el agar, establece un gradiente continuo de antimicrobiano a lo largo de la tira y después de la incubación se forma una zona elíptica de inhibición del crecimiento. La CMI se corresponde con el punto donde el borde del área de inhibición del crecimiento intersecciona con la tira. - MATERIAL Y REACTIVOS Se utilizan los mismos materiales que en el método de Kirby-Bauer, a excepción de las tiras de  Epsilon-Test . - PROCEDIMIENTO E
Leer más