PRÁCTICA: COPROCULTIVO

COPROCULTIVO

Microorganismos como protozoos, bacterias y virus pueden ser responsables de cuadros gastrointestinales caracterizados por diarrea, que a veces se acompaña de vómitos, dolor abdominal y fiebre. Ante la sospecha de gastroenteritis bacteriana es necesario realizar un cultivo de heces o coprocultivo que permita aislar e identificar al microorganismo responsable del proceso diarreico.

Se deben recoger las primeras heces de la mañana, tras una higiene escrupulosa de la zona rectal con agua y jabón.
Las heces se recogen en un recipiente limpio, libre de residuos de detergentes o desinfectantes, sin que se mezclen con la orina.
Con una espátula o cucharilla limpia (mejor estéril), se toma una pequeña cantidad de materia fecal, especialmente de las partes mucosas, purulentas o sanguinolentas y se trasladan a un frasco estéril de boca ancha.

Actualmente se impregnan, en abundancia, un par de escobillones y se introducen en sus tubos de soporte y transporte (medios tamponados con glicerina como el de Cary-Blair), para mantener viables los microorganismos e impedir su multiplicación.
Las muestras de heces deben procesarse lo más rápidamente posible, deben estar en el laboratorio antes de una hora para su procesado, o, en caso contrario, se mantendrán a 4ºC.

- APARATAJE

Estufa

- MATERIAL Y REACTIVOS

• Hisopo de algodón
• Mecheron Bunsen
• Suero salino fisiológico
• Agar S-S (Salmonella-Shigella)
• Agar Hektoen
• Agar Columbia
• Caldo Selenito

- PROCEDIMIENTO

1. Si las heces son líquidas se procesan directamente.

2. Si son heces sólidas se realiza una suspensión densa, en 2’5 ml de solución salina estéril, tomando una porción de heces del tamaño de un guisante y agitando hasta su homogeneización.

3. La siembra debe realizarse casi de inmediato pues algunos patógenos intestinales, concretamente Shigella y algunas especies de Salmonella, sobreviven muy poco tiempo a los cambios de pH que sufren las heces en contacto con el ambiente.

4. La siembra se realiza haciendo una estría, con el hisopo, desde un borde hasta la mitad de la placa. A continuación con un asa de siembra estéril (de punta redonda), se siembra por agotamiento de estrías en el resto de la placa.

5. Por último, se introduce el hisopo en el caldo selenito o tetrationato, agitándolo ligeramente (enriquecimiento).

6. Incubar las placas y el caldo a 37°C durante 24 horas.

7. Al día siguiente, se realiza una resiembra del caldo en agar S-S (ó HK). Para ello, con un asa estéril se toma una cantidad del caldo y se siembra.

- RESULTADOS

Agar Hektoen

En este caso sembramos E.coli, lo que produce un cambio en la coloración (de verde a amarillo).

Agar S-S

Solo han crecido unas pocas colonias, correspondientes a E.coli.

Agar Columbia

En nuestro caso las colonias son típicas de E.coli. 

En este medio, fomentamos el crecimiento de la microbiota fecal aerobia y también podemos ver el tipo de hemólisis. En este caso no produce hemólisis (gamma hemólisis).

Caldo Selenito

Cuando ya ha pasado el tiempo de incubación, hacemos una siembra en medio Hektoen para ver si ha crecido Salmonella o Shigella y lo volvemos a incubar.

Como vemos en la imagen las colonias que han crecido son iguales que las de antes, correspondientes a E.coli.

Eso quiere decir que en nuestra muestra no teníamos ni Salmonella ni Shigella.